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本溪PCR實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)四區(qū)分區(qū)法

時(shí)間:2025-12-19 15:09:41 點(diǎn)擊:32268次

各區(qū)工作流程必須嚴(yán)格遵循:試劑準(zhǔn)備 → 標(biāo)本制備 → 擴(kuò)增 → 產(chǎn)物分析。

分區(qū)別稱核心功能核心風(fēng)險(xiǎn)與控制目標(biāo)典型潔凈度/壓力要求
1. 試劑準(zhǔn)備區(qū)前處理區(qū)配制、分裝PCR主反應(yīng)混合液(不含模板)。存儲(chǔ)核心試劑。防止被模板或擴(kuò)增產(chǎn)物污染。 這是最“干凈”的區(qū)域。正壓最高。空氣潔凈度要求最高,建議達(dá)到萬級(jí)(ISO 7) 或十萬級(jí)(ISO 8)。
2. 標(biāo)本制備區(qū)樣品處理區(qū)臨床樣本的接收、登記、處理;核酸(DNA/RNA)的提取、純化、定量。主要污染源區(qū)(含模板)。 防止模板擴(kuò)散至試劑區(qū),并防止擴(kuò)增產(chǎn)物倒流入此區(qū)。相對于試劑區(qū)為負(fù)壓,相對擴(kuò)增區(qū)為正壓。 是生物安全核心區(qū),需按生物安全二級(jí)(BSL-2)設(shè)計(jì),排風(fēng)需獨(dú)立。
3. 擴(kuò)增區(qū)基因擴(kuò)增區(qū)將制備好的核酸模板加入反應(yīng)體系,進(jìn)行PCR循環(huán)擴(kuò)增。最大污染源區(qū)(產(chǎn)生大量擴(kuò)增產(chǎn)物)。 必須確保擴(kuò)增產(chǎn)物不擴(kuò)散至前區(qū)。相對于標(biāo)本區(qū)為負(fù)壓,相對產(chǎn)物區(qū)為正壓。 空氣需全排,嚴(yán)禁任何回風(fēng)。
4. 產(chǎn)物分析區(qū)電泳區(qū)對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳、測序、雜交等開蓋分析操作。極高暴露風(fēng)險(xiǎn)區(qū)(操作含高濃度產(chǎn)物)。 防止產(chǎn)物氣溶膠擴(kuò)散至其他任何區(qū)域。負(fù)壓最低(全實(shí)驗(yàn)室最低)。空氣必須獨(dú)立直排,并建議經(jīng)高效過濾器(HEPA)處理。

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